近日,日本京都大学的研究人员发表论文称,他们开发出一种CRISPR-Cas9基因编辑方法来实现对蟑螂的基因编辑。这项被称为“直接亲本CRISPR(DIPA-CRISPR)”的技术,可将材料注射到卵子正在发育的雌性成虫体内,而不是注入胚胎本身。
研究作者Takaaki Daimon说:“从某种意义上说,研究人员已经摆脱了要把材料注射卵子中的烦恼。我们现在可更自由、更随意地编辑昆虫基因组。原则上,这种方法适用于90%以上的昆虫物种。”
当前的昆虫基因编辑方法通常需要将材料显微注射到早期胚胎中,这严重限制了其在许多物种中的应用。例如,由于蟑螂独特的生殖系统,过去的研究尚未实现对蟑螂的基因操作。此外,昆虫基因编辑通常需要昂贵的设备、每个物种的特定实验装置以及高技能的实验室人员。
为了克服这些限制,研究人员将 Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 注入成年雌性蟑螂的主体腔内,以在发育中的卵细胞中引入可遗传的突变。结果表明,DIPA-CRISPR基因编辑效率(被编辑个体占孵化个体总数的比例)可高达22%。在红色面粉甲虫体内,效率达到50%以上。
DIPA-CRISPR在两个进化距离较远的物种中的成功应用表明了其广泛应用的潜力。但这种方法并不直接适用于所有昆虫物种,包括果蝇。此外,实验表明,最关键的参数是对成年雌性蟑螂注射的阶段。因此,使用DIPA-CRISPR技术需要掌握良好的卵巢发育知识。考虑到昆虫的不同生活史和繁殖策略,该技术在一些物种中的应用可能具有挑战性。
尽管有局限性,但由于DIPA-CRISPR技术易于实现,它可将基因编辑的应用扩展到广泛的昆虫物种。该技术只需最少的注射设备,而且仅需两种成分——Cas9核糖核蛋白和单引导RNA,大大简化基因编辑程序。此外,商用的标准Cas9可用于成年昆虫注射,无需耗时的蛋白质定制工程。
原则上,其他节肢动物也有可能用类似的方法进行基因组编辑。这包括螨虫和蜱虫等农业和医药害虫,以及虾和螃蟹等重要渔业资源。
该研究论文题为“DIPA-CRISPR is a simple and accessible method for insect gene editing”,已发表在《细胞报告方法》期刊上。
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